Лукьянова Н.А., Юхименко Л.Н., Бычкова Л.И. — ФГУП «Всероссийский научно-исследовательский институт пресноводного рыбного хозяйства»
Журнал «Рыбное хозяйство», 2008, № 5, С.64-67
Начало XXI века характеризуется активным развитием биотехнологий. Современная аквакультура очень тесно взаимодействует с этим направлением, особенно в узкой специализации. Таковой является ихтиопатология с разделом «Бактериальные болезни». Для борьбы с этой группой заболеваний разработаны различные препараты. Давно используются антибиотики, но в последние 10-15 лет апробируются и внедряются пробиотические препараты.
На протяжении ряда лет лаборатория ихтиопатслогии Всероссийского научно-исследовательского института пресноводного рыбного хозяйства (ВНИИПРХ) занимается разработкой мер профилактики и лечения бактериальной геморрагической септицемии (аэромоноза) рыб. Для этого были предложены биохимическая вакцина ВЮС-2 [Временное наставление по применению вакцины против аэромоноза (бактериальной геморрагической септицемии. М., 1992], инактивированная формолвакцина (ИФВ) [Юхименко Л.Н., Бычкова Л.И., Койдан ГС. Разработка бактерина против аэромоноза// Проблемы охраны здоровья рыб в аквакультуре/ Сб. тез. докл. науч.-прак. конфер. 21-22 ноября 2000 г. М: Изд-во Россельхозакадемии, 2000. С. 129-131] и проводятся серии испытаний пробиотических препаратов «Субалин», «Зоонорм» и др. [Лукьянова Н.А. Пробиотические препараты и микроорганизмы, обладающие пробиотическими свойствами, применяемые в рыбоводстве// Рациональное использование пресноводных экосистем — перспективное направление реализации национального проекта «Развитие АПК» (2007, Москва)/ Международная научно-практическая конференция, 17-19 декабря 2007 г.: Материалы и доклады/ ГНУ ВНИИР Россельхозакадемии. М.: Изд-во Россельхозакадемии, 2007. С. 177-180].
С 2005 по 2007 г. на базе выростных прудов экспериментально-производственного отдела «Якоть» ФГУП «ВНИИПРХ» проводились опытные кормления с использованием пробиотического препарата «Зоонорм» (ЗАО «Партнер», г. Москва).
«Зоонорм» представляет собой лиофилизированную микробную массу живых антагонистически активных бактерий вида Bifidobacterium bifidum штамма № 1, иммобилизованных на частицах измельченного активированного угля.
По внешнему виду препарат представляет собой порошок от светло-серого до темно-серого цвета, с черными вкраплениями. «Зоонорм» имеет сладковатый вкус и слабый кисломолочный запах. При растворении в воде образуется суспензия с частичками сорбента черного цвета.
«Зоонорм» расфасован в стерильные пакеты из металло-полимерного многослойного материала (цефлена) по 5; 10; 100 доз. В одной дозе препарата содержится не менее 1х107 КОЕ (колониеобразующих единиц) бифидобактерий. Препарат безвреден, побочных действий не вызывает.
На пакетах нанесена маркировка, на которой указаны: наименование препарата, количество доз в одном пакете, номер серии, номер контроля, срок годности, надпись «Для животных».
Хранят «Зоонорм» в сухом месте при температуре от 2 до 10° С. Срок годности -1 год с даты изготовления. Пакеты с нарушенной целостностью упаковки, содержащие плесень и другие примеси, выбраковываются.
Активность препарата «Зоонорм» определяют содержащиеся в нем микроколонии бифидобактерий, которые обладают антагонистической активностью против широкого спектра патогенных и условно-патогенных микроорганизмов и тем самым нормализуют микрофлору кишечника, деятельность желудочно-кишечного тракта, улучшают обменные процессы, повышают усвояемость кормов. Микроколонии бифидобактерий, сорбированные на активированном угле, способствуют выведению токсических метаболитов, активируют процесс пристеночного пищеварения, осуществляют физиологическую защиту кишечного барьера от проникновения микробов и токсинов во внутреннюю среду организма, образуя пленку на слизистой оболочке кишечника.
«Зоонорм» способствует повышению неспецифической резистентности организма и стимуляции роста и развития рыб.
«Зоонорм» применяют перорально групповым методом в целях профилактики и лечения желудочно-кишечных инфекций рыб, бактериальной геморрагической септицемии, вызванной различными грамнегативными бактериями. При этом способе используют пакеты с различной дозировкой. Расчетное количество препарата, необходимое для разового применения для данного количества рыб, разводят в питьевой воде температурой не выше 37°С (ориентировочно 1000 доз в 0,5 л) и полученную суспензию перемешивают с общим количеством корма, необходимым для одного кормления. При смешивании с сухим кормом количество препарата для разового применения последовательно смешивают со 100-200 г корма, а затем — с количеством корма, необходимым для одного кормления.
Недопустимы растворение препарата в горячей воде и хранение его в растворенном виде.
С профилактической целью препарат используют для рыб на стадии личинки при переходе на внешнее питание, после применения антибактериальных препаратов, для уменьшения отрицательного воздействия кормов низкого качества; для осетровых рыб — перед снятием морфометрических показателей и проверкой гонад (табл. 1).
В лечебных целях «Зоонорм» применяют для названных выше категорий рыб в дозировках, указанных в табл. 1. Курс лечения рыб составляет 10-15 сут. в прудовом хозяйстве, 15-20 сут. — в садковых хозяйствах и установках замкнутого типа водообеспечения.
Величина дозы и продолжительность лечения могут быть увеличены в зависимости от возраста и массы рыбы, а также от степени тяжести болезни по усмотрению специалиста-ихтиопатолога.
При одновременном назначении препарата «Зоонорм» с витаминами, особенно группы А, В, С, эффективность его действия повышается. Одновременный прием с антибактериальными препаратами снижает эффективность действия препарата «Зоонорм» [Временное наставление по применению пробиотического препарата «Зоонорм» в рыбоводстве (в порядке производственных испытаний в 2007 г.). Утверждено 1.06.2007 а. 4 с].
При проведении эксперимента для зарыбления прудов использовали двухлетков карпа с отсутствием клинических признаков аэромоноза. Плотность посадки (по рыбоводно-биологическим нормативам) для условий зон рыбоводства — 2,5 тыс. экз/га. Вся рыба получала продукционный комбикорм для двухлетков и трехлетков карпа: контрольная группа (К 2) — без добавок; первая опытная группа (О 2) — кормление с минимальными дозами «Зоонорма» в течение вегетационного периода; вторая опытная группа (О 3) — с добавлением «Зоонорма» курсами по 10 дней [Лукьянова Н.А., Юхименко Л.Н., Бычкова Л.И. Применение пробиотиков «Субалин» и «Зоонорм» в прудах ЭПО «Якоть» и экономические затраты на пробиотики и корм за летний сезон// Сб. науч. трудов «Актуальные вопросы пресноводной аквакульту-ры». Вып. 81. М.: Компания Спутник*, 2006. С. 129-135].
Перед началом испытаний по методу случайной выборки отбирали по 10 экз. рыб (группа К 1), от которых брали кровь для иммунологических исследований, и делали посев паренхиматозных органов (печени и почек) на среду Эндо — для определения уровня контаминации рыб и выделения и определения энтеробактерий, аэромонад и неферментирующих щелочеобразователей (НФЩ).
Из прудов, в которых сидела рыба, проводили отбор проб воды для исследования микробиоценоза. Количественный посев воды делали на плотные питательные среды: эритрит-агар — для определения общего микробного числа (ОМЧ) и Эндо — для выделения и определения энтеробактерий, аэромонад и НФЩ.
Контроль за эпизоотическим состоянием в прудах осуществлялся ежедекадно. Кормление с пробиотиками проводили: в 2005 г. — с 6.06 по 31.08; в 2006 г. — с 1.06 по 31.08; в 2007 г. — с 21.05 по 14.07.
Для оценки влияния пробиотика на иммуно-физиологический статус рыб изучали бактериостатическую активность сыворотки крови (БАСК), титр агглютинирующих антител (ТАА), уровень контаминации паренхиматозных органов и приживаемость бифидум-бактерий в кишечнике. Для определения приживаемости бифидумбактерий по 1 мл соскобов со слизистой кишечника вносили в пробирки с 9 мл бифидум-среды, после чего делали ряд 10-кратных разведений. Посевы инкубировали при 37°С в течение суток, после чего проводили учет. Бифидум-бактерии определяли по наличию характерных колоний в анаэробной среде.
Характеристика уровня бактериальной обсемененности (ОМЧ) и микробиоценоз воды приведены в табл. 2.
Наличие в воде анаэрогенных аэромонад — A. caviae, A. sp. 7, A. sp. 9 — характеризует высокий уровень органического загрязнения. В целом этиологическая структура аэромонад была весьма пестрой. Чаще всего выделялись A. caviae, A, eucrenophila, А. hydrophila, БГКП; единичными изолятами были представлены А. sopia, A. sp. 2, A. sp. 11, A. sp. 3, A. sp. 9 и Moraxella.
При исследовании патолого-анатомической картины у рыб различных групп было отмечено: увеличение паренхиматозных органов, рыхлость слизистой и рвущиеся стенки кишечника. Приживаемость бифидум-бактерий в 2005 г. при минимальной дозировке у 75 % рыб была в титрах 3×108 — 1×109 — 7×109. У тех рыб, от которых бифидум-бактерий не высевались, кишечник был рвущийся, с рыхлой, отечной слизистой. При курсовом применении «Зоонорма» состояние внутренних органов было более удовлетворительное, а высеваемость — в таких же титрах. В 2006 г. приживаемость «Зоонорма» отмечали в обеих группах, но при курсовом применении — в более высоких титрах (табл. 4) [Лукьянова Н.А., Юхименко Л.Н., Бычкова Л.И. Применение пробиотиков «Субалин» и «Зоонорм» в прудовом рыбоводстве// Сб. науч. трудов «Актуальные вопросы пресноводной аквакультуры». Вып. 83. Дмитров: ИД «Вести», 2007. С. 173-179].
В течение трех лет производственных испытаний иммунологические показатели — бактериостатическая активность сыворотки крови (БАСК) и титр агглютинирующих антител — дали достоверные показатели (табл. 5) [Лукьянова и др., 2006; 2007].
Проведенные исследования показали эффективность применения «Зоонорма» для повышения иммуно-физиологического статуса рыб. Однако отмечено, что значительное усиление бактериального прессинга на рыбу влияет на иммунологические показатели, в частности, на титр агглютинирующих антител, так как значительный расход энергетических ресурсов рыбы затрачивается на борьбу с контаминантами. Поэтому применение пробиотического препарата должно сочетаться с проведением дезинфекционных мероприятий в прудах и созданием оптимальных условий для рыб. Одновременно с этим своевременный рыбоводный и их-тиопатологический контроль по рыбоводным и клиническим показателям позволит оценить качество выращиваемой рыбы и выявить отрицательные факторы, воздействующие на нее.
Таблица 1
Возрастная категория рыб |
Доза препарата |
|
---|---|---|
профилактическая |
лечебная |
|
Личинки, мальки | 0,001 дозы/2 кормления в сутки | 0,01 дозы/3-4 кормления в сутки |
Сеголетки, годовики | 0,001 дозы/1-2 кормления в сутки | 0,01 дозы/2-3 кормления в сутки |
Товарная рыба | 0,01 дозы/1-2 кормления в сутки | 0,1 дозы/2-3 кормления в сутки |
Ремонт и производители | 0,5-1 доза/1-2 кормления в сутки | 1-5 доз/2-3 кормления в сутки (для карпа); 5-10 доз/2-3 кормления в сутки (для осетровых) |
Таблица 2
Дата |
Группа |
Эритрит-агар |
Эндо |
Микробиоценоз |
||
---|---|---|---|---|---|---|
КОЕ/мл |
типов колоний |
КОЕ/мл |
типов колоний |
|||
31.05.2005 |
К1 |
780 |
5 |
220 |
2 |
БГКП, A. sp. 1, A. sp. 9 |
02 |
620 |
4 |
-280 |
3 |
БГКП, A. sp. 1, A. sp. 3, A. sp. 7 |
|
03 |
320 |
3 |
260 |
3 |
БГКП, A. sopia |
|
17.05. 2006 |
К 1 |
640 |
2 |
280 |
2 |
A. eucrenophila, A. sp. 2 |
02 |
340 |
2 |
640 |
3 |
A. eucrenophila, A. sp. 11 |
|
03 |
860 |
3 |
680 |
2 |
БГКП, A. veronii |
|
28.05.2007 |
К 1 |
680 |
2 |
240 |
2 |
БГКП, A. hydrophila |
02 |
2900 |
2 |
2580 |
2 |
БГКП, A. caviae |
|
03 |
6460 |
2 |
6240 |
1 |
Moraxella, A. caviae |
Таблица 3
Группа |
Уровень контаминации (абс/%) |
|||||
---|---|---|---|---|---|---|
ЛЕТО </th > |
ОСЕНЬ |
|||||
2005 г. |
Роста нет |
Единичный |
Ум/об. |
Роста нет |
Единичный |
Ум/об. |
К 1 |
12/58,2 |
2/8,4 |
6/33,4 |
16/80,0 |
1/5,0 |
3/15,0 |
02 |
17/85,0 |
2/10,0 |
1/5,0 |
19/95,5 |
1/4,5 |
— |
03 |
7/33,3 |
5/25,0 |
8/41,7 |
18/90,0 |
— |
2/10,0 |
2006 г. |
ЛЕТО |
ОСЕНЬ |
||||
К 1 |
18/90,0 |
1/5,0 |
1/5,0 |
6/60 |
4/40 |
— |
02 |
19/95,0 |
— |
1/5,0 |
21/95,5 |
1/4,5 |
— |
03 |
20/00,0 |
— |
— |
18/90 |
— |
2/10 |
2007 г. |
ЛЕТО |
ОСЕНЬ |
||||
К 1 |
— |
1/5,0 |
19/95,0 |
9/45,0 |
3/15,0 |
8/40,0 |
02 |
9/45,0 |
10/50,0 |
1/5,0 |
14/70,0 |
1/5,0 |
5/25,0 |
03 |
6/30,0 |
13/65,0 |
1/5,0 | 7/35,0 |
5/25,0 |
8/40,0 |
Примечание. Ум/об. — умеренно-обильный рост.
Таблица 4
«Зоонорм» (т/л) |
«Зоонорм» (курс) |
||
---|---|---|---|
№ рыбы |
Результат |
№ рыбы |
Результат |
1 |
Зх105 |
1 |
1х109 |
2 |
2×104 |
2 |
5×108 |
3 |
5×103 |
3 |
1 х107 |
4 |
3×104 |
4 |
2×106 |
5 |
2×104 |
5 |
1х108 |
6 |
3х105 |
6 |
3×106 |
7 |
Зх105 |
7 |
4×106 |
8 |
1х104 |
8 |
1×103 |
9 |
1х105 |
9 |
3×104 |
10 |
2×107 |
10 |
2 x105 |
Таблица 5
Группа |
БАСК |
ТАА |
|
---|---|---|---|
к антигену 77-18 |
к антигену 331-БТ |
||
ОСЕНЬ 2005 г. |
|||
К 1 |
24,8 ± 15,2 |
5,0 ± 3,9 |
0 |
02 |
53,6±19,9 |
6,0 ±4,8 |
0 |
03 |
14,4 ±8,4 |
5,7 ±3,1 |
0 |
ВЕСНА 2006 г. |
|||
|
к антигену 77-18 |
к антигену 360-2 |
|
К2 |
74,6 ± 18,1 |
3,3 ± 2,8 |
2,1 ± 0,8 |
02 |
99,6 ± 0,0002 |
3,6 ± 1,6 |
3,1 ± 1,1 |
оз |
99,4 ± 0,0004 |
3,6 ± 2,8 |
4,0 ± 1,5 |
ЛЕТО 2006 г. |
|||
К 1 |
39,6 ± 4,9 |
5,7 ± 2,4 |
3,3 ± 1.6 |
02 |
37,1 ± 2,4 |
4,6 ± 0,8 |
4,3 ± 0,9 |
03 |
58,6 ± 2,9 |
5,8 ± 0,2 |
4,0 ± 0,8 |
ОСЕНЬ 2006 г. |
|||
К 1 |
72,6 ± 13,4 |
7,4 ± 1,8 |
4,8 ± 1,4 . |
02 |
90,5 ± 0,95 |
6,3 ± 1,2 |
3,9 ± 2,1 |
03 |
96,3 ± 0,04 |
7,5 ± 1,2 |
3,9 ± 0,6 |
ВЕСНА 2007 г. |
|||
К 1 |
38,3 ± 0,9 |
8,1 ± 0,09 |
0 |
02 |
57,3 ± 2,0 |
6,0 ± 5,2 |
0 |
03 |
62,0 ± 6,9 |
7,8 ± 3,6 |
0 |
ЛЕТО 2007 г. |
|||
К 1 |
35,5 ± 5,4 |
8,3 ± 2,0 |
0 |
02 |
44,8 ±6,7 |
10,4 ± 1,4 |
0 |
ОЗ |
57,0 ± 2,2 |
10,7 ± 1,0 |
0 |
\ ОСЕНЬ 2007 г. |
|||
К1 |
35,7 ± 1,8 |
4.1 ± 2,1 |
0 |
02 |
48,7 ± 3,1 |
9,5 ± 1,3 |
0 |
ОЗ |
35,3 ± 2,5 |
9,4 ± 5,0 |
0 |